产品结果实例:
实验方法:6-8周龄C57BL/6小鼠尾静脉注射AAV8-HBV(注射剂量1.0×1011vg),连续监测6个月。
实验结果:
小鼠血清中能够持续6个月检测到HBV的基因组,建模后2个月能稳定在106copy/mL水平,肝脏组织中HBV的基因组呈现增加趋势,表明有HBV基因组复制的发生;同时血清中能够检测的HBV 的S抗原和E 抗原,1-2个月达到高峰,并持续稳定在一个恒定的水平(图1.)。免疫组化的方法检测肝脏组织中HBsAg与HBcAg的表达,建模6个月时,大约50%的肝脏细胞能呈现这两种抗原的表达(图2.)。Masson 染色和Siresred 染色结果表明,肝脏组织中有明显的胶原蛋白的累积和胶原纤维的生成(图3.)。
该产品的电镜结果显示,为均一的六边形病毒颗粒,90%为包装有HBV基因组的实心颗粒,约10%为不含目的基因的空壳蛋白(图4.)。
图1. 模型小鼠血清和肝组织内HBV标志物变化
A:血清中HBV基因组变化;B:肝组织内HBV基因组变化;C:血清中表面抗原(HBsAg)分泌;D:血清中e抗原(HBeAg)分泌。
图2. 模型小鼠肝组织内HBsAg与HBcAg免疫组化(6个月)
图3.Masson染色和天狼星红染色检测模型小鼠肝组织胶原增生(6个月)
图4. 电镜下AAV8-HBV病毒粒子形态
产品应用实例:
1. Lei Ye, Haisheng Yu, Chengwen Li, Matthew L. Hirsch, Liguo Zhang, R.Jude Samulski, Wuping Li*, Zhong Liu. Adeno-Associated Virus Vector Mediated Delivery of the HBV Genome Induce Chronic Hepatitis B Virus Infection and Liver Fibrosis in Mice, Plos One. 2015 Jun 15;10(6):e0130052. doi: 10.1371/journal.pone.0130052. eCollection 2015.
2. Lei Ye†, Fangming Kan†, TaoYan, Jiaqi Cao, Leiliang Zhang, Zhijian Wu* & Wuping Li*. Enhanced antiviral and antifibrotic effects of short hairpin RNAs targeting HBV and TGF-beta in HBV-persistent mice. Sci Rep. 2017 Jun 20;7(1):3860. doi: 10.1038/s41598-017-04170-1.
3. Fangming Kan†, Lei Ye†, Tao Yan, Jiaqi Cao, Jianhua Zheng* and Wuping Li*. Proteomic and transcriptomic studies of HBV-associated liver fibrosis of an AAV-HBV-infected mouse model. BMC Genomics. 2017 Aug 22;18(1):641. doi: 10.1186/s12864-017-3984-z.